Adeno-associated Virus (AAV)由于具有良好的安全性,宿主细胞范围广,在体内表达外源基因时间长等特点,是目前多数基因疗法采用的病毒载体之一。AAV 在自然界内广泛存在,并有上千种血清型,因此大多数的人体内及哺乳动物体内都已存在AAV 抗体。
为了更好的预测潜在的免疫反应,优化完善临床前及临床时间的设计,以帮助进行个体的筛选和匹配,评估个体内预存的抗AAV 抗体在基因治疗的研究中至关重要。该评估在保证准确解释临床试验结果的同时,提高了临床检测的安全性和有效性,从而有利于基因治疗的发展和实施治疗。此外,在临床前研究中,动物也必须接受预先存在的筛查抗AAV抗体,从而对物种间和物种内的选择提供依据。
目前已开发了多种筛选抗AAV抗体的检测方法。这些方法一般基于细胞的转导抑制(TI)进行测定,通常被称为中和抗体(NAb)测定,以评估中和抗体(NAb)的影响。此外, 还有总抗体(TAb)测定,也称为结合抗体测定,鉴定所有与衣壳结合的AAV抗体,无论它们的中和能力如何。TAb 的测定由于具有速度快,灵敏度高和更易操作等特点,被广泛的用于抗AAV 抗体的大量样品筛选。
TAb的检测方法有抗原捕获法和桥联法,两种方法的检测形式如下:
01 分析方法开发时间长:需要针对不同的血清型AAV以及物种进行特定的分析方法开发,并向监管部门提供方法可靠性依据,耗时耗力。
02 需要对AAV进行标记:目前使用的TAb检测方法需要使用特定血清型的AAV 衣壳进行包被和标记,因此需要大量的人工操作,增加检测变异性的风险,导致数据的可重复性降低;另外需要消耗大量昂贵的AAV 衣壳,检测成本高。
03 大量样品筛选,需要投入大量人力:大型动物(特别是NHPs)广泛暴露于AAV并可能预先存在与AAV血清型交叉反应的抗体。为确保模型的有效性和对临床前结果的正确解释,需要对大量样品进行抗AAV 抗体的筛选。
04 传统ELISA 方法消耗大量样品,导致最终产品的产率降低。
Gyrolab通用抗AAV抗体检测试剂盒简化了AAV预存抗体的检测流程,同时适用于Cyno和人类样品的检测。