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TECHNICAL ARTICLES
更新时间：2025-11-05
点击次数：34
来自罗氏的 Gregor Jordan 等人基于 Gyrolab 平台开发了一种全血清中检测游离抗原的免疫分析方法，该方法旨在解决以下游离物分析中的挑战：
样本的稀释导致抗原-抗体复合物解离，高估游离抗原浓度
抗体-抗原复合物半衰期短（<100秒），传统LBA方法无法准确捕捉
存在治疗性抗体时，难以区分游离与结合状态的抗原
该方法采用桥接免疫分析原理，具体步骤如下：
1
将标记后的捕获抗体包被在链霉亲和素的亲和柱上
2
加入未稀释血清样本，使游离抗原与捕获抗体结合
3
加入标记的检测抗体与抗原的另一表位结合
4
检测信号，定量游离抗原
方法关键要求
捕获抗体与检测抗体识别的抗原表位不重叠
捕获抗体与治疗性抗体竞争结合抗原的相同表位
孵育时间极短（优选<2秒）
无需样本稀释，避免复合物解离
研究目的
评估抗体药物对 CCL2 的“清除效率"，即抗体是否有效结合并清除游离 CCL2。
研究方法
平台与方法
实验设计
校准曲线与质控
校准范围：2430 pg/mL → 10 pg/mL
QC 样本：
High QC：1820 pg/mL
Mid QC：230 pg/mL
Low QC：30 pg/mL
接受标准：
±20% 偏差，CV < 15%
药物干预组
CNTO0888：单特异性抗 CCL2 抗体（对照）
CKLO2-SG1095：双特异性抗 CCL2 抗体（实验组）
浓度设置：
低剂量：7.5 ng/mL 或 15 ng/mL
高剂量：10 μg/mL
结果与讨论
CNTO0888 在高浓度下几乎全清除游离 CCL2
CKLO2-SG1095 的清除效率略低，但仍显著优于空白组
低剂量下双抗仍有中等清除能力，提示其剂量依赖性
研究目的
在不稀释的血清样本中，快速、精准地测定游离补体 C5 的浓度，用于评估抗 C5 抗体药物（如 eculizumab、crovalimab）的体内药效。
研究方法
平台与方法
实验结果
标准曲线线性范围： 0.55 – 3000ng/ml
LOQ：0.5 ng/mL，足以检测 < 0.1 % 的游离 C5（人总 C5 ≈ 400 nM）
总 结
方法技术优势
Gyrolab 平台有的免孵育流穿模式，大程度降低基质中的非特异性结合，有效降低基质干扰，在游离物分析中可以支持全血清检测，并且减少因孵育造成的抗体-抗原复合物的解离，使游离物的分析更加准确高效。
参考文献：
[1] Method for determining the free antigen of an antibody in a sample, Gregor Jordan, Martin Schaefer, Maria Viert; Pub No. US2023/0393125 A1。
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