固相多肽合成：“快”与“纯”，真的不能兼得吗？

常温下快速合成人胰岛素原，粗肽纯度稳稳 >80%

多肽圈有个老观念：想快，就得舍纯。

传统工艺里，脱保护往往要 20–30 分钟，偶联更是动辄 1 小时以上。大家默认“靠延长反应时间来保产率”，于是“慢”几乎成了高纯度的代名词。

但真相是——当 Fmoc 化学的条件被精确优化，速度与纯度可以同时达成。

以 人胰岛素原 C 肽（Human Proinsulin C-Peptide） 为例，我们用一套常温快速方案，把单个氨基酸的平均循环时间压到了 约 12.5 分钟。

先认识这条多肽

H-EAEDLQVGQVELGGGPGAGSLQPLALEGSLG-OH

（共 32 个氨基酸）

合成条件一览

活化剂怎么选？为什么是 PyBOP

𬭸𬭩盐类活化剂（如 BOP、PyBOP、PyAOP）长期是多肽缩合反应的主力试剂：常温下即具备高反应活性，低温条件下同样能快速完成偶联。

· BOP 因副产物 HMPA 致癌，已退出主流；

· PyBOP 与 PyAOP 显著降低了副产物毒性，成为目前应用很广泛的𬭸𬭩盐活化剂。

与此同时，以 HATU、HBTU 为代表的碳𬭩盐（Uronium）类活化剂近年大量应用，却存在一个棘手问题——容易引发 N 端胍基化副反应（guanidination），由此产生的杂质会给后处理带来麻烦。

而𬭸𬭩盐因反应机理不同，不存在胍基化风险。

综合杂质控制与反应活性，本研究选用 PyBOP 等𬭸𬭩盐活化剂，并全程室温完成合成——既规避碳𬭩盐的胍基化副反应，也避开了高温可能引起的氨基酸消旋。

实测：两大平台都跑得通

为了验证方法的普适性，我们在两台不同平台、用相同参数分别合成同一条多肽。

 使用 Symphony X 合成多肽的粗肽色谱图，纯度 81.7%。

使用 Prelude 合成多肽的粗肽色谱图，纯度 83.2%。

两条曲线效果基本一致 —— 说明这套参数不挑平台。

结果总结

·       常温下使用 PyBOP 体系合成 32 个氨基酸的多肽，合成 + 自动切割总时长仅 8.7 小时；

·       单个氨基酸平均 Cycle 时间约 12.5 分钟，粗肽纯度仍 >80%；

·       同一参数在 Symphony X 与 Prelude 上分别合成，效果基本相同，方法适用性高。

写在最后

“快”和“纯”并不是一道单选题。

当活化剂选对、反应条件调准，常温快速合成同样能守住高纯度——这对追求效率的多肽下游工艺来说，或许是一个值得尝试的方向。