高通量LBA免疫分析加速ADC药物分析方法的开发与检测

　　抗体偶联药物（Antibody-Drug Conjugates, ADCs）是一类由单克隆抗体和具有强效细胞毒性的小分子药物通过生物活性连接子偶联而成的新型生物药物，其药物作用机理为利用单克隆抗体的特异性来靶向肿瘤特异性抗原，并将小的细胞毒性分子输送到肿瘤中杀死癌细胞，因此ADC兼具抗体药物的肿瘤靶向性和小分子药物的强大杀伤效应，能最大限度地减少对正常组织细胞的毒性。

　　ADC药物由三个部分组成：人源化单克隆抗体（mAb）、细胞毒性荷载（Cytotoxic payload）和连接子（Linker），因此ADC药物比传统的抗体药物或细胞毒性小分子药物具有更为复杂的结构和质量属性，对于ADC药物的生物分析方法开发也更为困难、费时且要求更高。

　　在进行 ADC 药物的毒理学和药代动力学时等，由于样品种含有游离的抗体和小分子毒素，不但需要对完整的 ADC 进行定量，还需要对总抗体和小分子进行定量，以便得到完整的毒理和药代数据。一般采用配体结合试验（Ligand Binding Assay）对抗体偶联物和总抗体进行定量，然后通过液相色谱-串联质谱法（liquid chromatography-tandem mass spectrometry，LC-MS/MS）对结合型和游离的小分子毒素以及毒素相关代谢物进行分析。在本案例中，辉瑞公司采用 Gyrolab® 高通量自动免疫分析工作站，快速开发了对 ADC 药物的总抗体和有效载荷进行定量检测的方法。

　　在本案例中，捕获试剂为生物素化抗人 IgG Fc 单克隆抗体，使用 Alexa Fluor® 647荧光标记的抗人 kappa 抗体来测量总抗体，ADC 检测使用的检测试剂为 Alexa Fluor® 647 荧光标记的抗效应分子抗体。

　　检测结果

　　用于完整 ADC 和总抗体检测的样品取自 ADC 给药和裸抗体给药的大鼠。结果显示 Gyrolab 检测可以明确区分完整 ADC 与总抗体的药代动力学，并且在不同天进行检测的标准曲线具有良好重复性，确保为检测优化提供更有力的数据。

　　体内完整的ADC和总抗体检测

　　标准曲线重现性

　　结论

　　Gyrolab 自动免疫分析技术在广泛的动态范围内提供了高精度的结果，高重现性确保了有效的检测优化过程。纳升级的测定需要的试剂和样品消耗量低，可以大大减少测试所需的大鼠血清。而且 Gyrolab 工作站的自动化、易用性和快速检测周转节省了分析员的时间，提高了时间关键型工作流程的生产力和效率。与传统 ELISA相比，Gyrolab 工作站在检测开发和运行时间、样品和试剂用量等方面具有明显优势，使其成为 ADC 临床前和临床药代动力学/毒代动力学研究的理想生物分析平台。

　　Gyrolab检测优势

　　1.快速方法开发：高效筛选捕获和检测试剂，方法开发仅需2-4天。

　　2.高效的ADC评估：同时在体内样本中筛选数百种连接体-荷载组合。

　　3.更少的样品和更少的实验动物：Gyrolab检测仅需＜10 μL/样本，允许连续的小动物采血。

　　4.分析速度快，数量产量高：一张CD不到一小时就有结果。5张CD自动运行提供了更高的数据产量和过夜运行能力。

　　5.更宽的动态范围：具有3-4对数动态范围，检测需要更少的稀释。

　　6.更少的资源：自动化和平行处理最大限度地减少了实验室人员的时间。

　　本案例中的所有研究数据和与ELISA的对比均由辉瑞公司提供。