仅需72小时！复杂长肽合成难题，Symphony X如何实现突破？

　　传统固相合成（SPPS）中，因肽链长达42个氨基酸，且C端富含疏水性氨基酸，极易导致与树脂发生聚集，从而导致缩合的难度很高；另外C端附件没有Ser（丝氨酸）或Thr（苏氨酸），无法使用伪脯二肽以降低聚集风险；过去手动合成往往耗时长达两周，且需依赖昂贵的亲水性树脂，成本高昂，令许多实验室望而却步。

　　一、挑战真的无解吗？

　　1.最新案例给出了突破性答案

　　研究团队利用 Symphony X 24 通道自动化多肽合成仪，结合一项巧妙的“原料替换”策略，成功实现了高质量β淀粉样类蛋白的高效合成。

　　2.实验序列信息：

　　H-DAEFXHDSGXEVXHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVVIA-OH

　　二、合成方法及分析

　　SPPS合成及切割条件

　　1.合成当量：0.15mmol

　　2.树脂类型及载量：Fmoc-Ala-Wang树脂，0.325mmol/g

　　3.缩合条件：AA:DIC:HOBT=1:1:1

　　4.氨基酸用量系数：6.0-8.0（按序列调整）

　　5.脱保护条件：20%哌啶溶液

　　6.切割液：TFA/H2O/Phenol/Thioanisole/EDT(82.5:5:5:5:2.5)

　　合成方案的设计

　　根据预测软件模拟运算的结果，序列中前14个氨基酸中有多个位点存在高聚集风险，在无法替换PEG材质树脂的前提下，推荐选择特殊的原料；本案例中我们对两个Gly的位点选用Fmoc-(Dmb)Gly-OH替换普通的Fmoc-Gly-OH，依靠N端连接的Dmb保护基团，抑制合成过程中肽链的聚集。

　　Fmoc-(Dmb)Gly-OH（CAS No.:166881-42-1）结构简式
 

　　使用SymphonyX自动合成，总体合成时间约72小时，合成后的多肽经过切割沉降后，产物用ACN:H2O=1:1的混合溶剂溶解，超声过滤得到清液后，使用HPLC-MS系统进行粗肽纯度及分子量的分析。粗肽色谱图及对应的质谱图如下所示：

　　HPLC色谱图

　　MS谱图

　　主峰峰面积百分比51%，并且对应的目标分子量为目标肽；另外临近主峰的杂质峰响应不足主峰15%，后期的制备纯化难度将会明显降低。

　　三、合成效率实现飞跃

　　1.合成时间：从传统手动约2周，缩短至约72小时（自动合成）。

　　2.树脂成本：无需Chem Matrix, Tenta Gel等高价亲水性树脂，使用常规PS材质树脂即可完成。

　　3.粗肽质量：合成后纯度达51%，且主要杂质峰响应均低于主峰15%，后续纯化难度显著降低。

　　四、为何这项突破很重要

　　β淀粉样蛋白作为AD的核心生物标志物，其可及性与合成质量直接影响病理研究、诊断试剂及疗法的开发进度。本方案不仅大幅提升了合成速度和成功率，更通过经济可行的原料替代，降低了研究门槛，让更多团队能高效获取这一关键研究材料。

　　这项合成策略的优化，不仅为β淀粉样蛋白的制备提供了高效、经济的方案，也为其他含有多个甘氨酸或易聚集序列的长肽合成，开辟了新的解决思路。